故事發生在抗日戰爭初期。國軍中校馬烽（宋佳倫 飾）奉命組建“025敢死隊”，以伺機襲擊南京城內的日寇，他從被即將行刑的死囚中挑選了五個他認為合格的隊員，他們是蘇維埃政府軍械部長麻老五（韓童生 飾）、中情局特工徐飛虎（楊猛 飾）、飛賊唐人杰（郭鐵城 飾）、以及強大龍（鐵鶴 飾）和朱大山。經過嚴格布置后，馬烽帶他們進入日寇鐵蹄下的南京城，成功營救出兩名援華的美國醫生，并保護了他們所拍攝的南京大屠殺膠片。之后，他們冒著極大風險，成功刺殺日軍駐南京最高指揮官熊本連太郎，并奪回國寶——傳國玉璽。最后，他們為給殉難的三十萬同胞復仇，決定在日軍高官開會時與敵人同歸于盡……
這次行動，事關重大。消息是潛伏在妙底十年的一名臥底傳回來的。
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